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La luteolina es un compuesto flavonoide natural, y los siguientes son algunos métodos de detección comunes:
La cromatografía líquida de alto rendimiento se basa en la diferencia en los coeficientes de distribución de diferentes sustancias entre la fase estacionaria y la fase móvil para la separación. La muestra se inyecta en una fase móvil (generalmente un disolvente o disolvente mixto), que lleva la muestra a través de una columna cromatográfica llena de una fase estacionaria (como gel de sílice). Los diferentes compuestos se mueven a diferentes velocidades en la columna para lograr la separación. Finalmente, se detectó luteolina mediante detectores UV Vis, ya que tiene una longitud de onda de absorción UV específica.
Preparación de la muestra: Extraer y disolver extractos de plantas u otras muestras que contengan luteolina en disolventes apropiados (como metanol, etanol, etc.), y realizar pasos previos al tratamiento como filtración y centrifugación para eliminar las impurezas.
Ajuste de condición cromatográfica: Seleccione una columna cromatográfica adecuada (como la columna cromatográfica de fase inversa C18), y la fase móvil puede ser un sistema de agua de metanol o acetonitrilo. Agregue una cantidad adecuada de ácido (como ácido fórmico, ácido fosfórico) de acuerdo con la situación real para mejorar el efecto de separación. El caudal generalmente está entre 0,8-1,5 ml/min, y la temperatura de la columna generalmente se establece a temperatura ambiente o a una temperatura constante adecuada (como 30-40 ℃) según sea necesario. La longitud de onda de detección generalmente se establece en alrededor de 350nm, la longitud de onda de absorción máxima de luteolina.
-Inyección y análisis: Inyecte la muestra procesada en el puerto de inyección del cromatógrafo, registre el cromatograma a través de un software informático y realice un análisis cualitativo y cuantitativo de la luteolina basado en el tiempo de retención y el área del pico.
La alta eficiencia de separación puede separar eficazmentePolvo a granel de luteolinaDe otras impurezas en muestras complejas.
Alta sensibilidad de detección, capaz de detectar bajas concentraciones de luteolina.
Los resultados son precisos, tienen buena reproducibilidad y son adecuados para el análisis cuantitativo.
Desventajas:
Los instrumentos y equipos son caros y requieren habilidades profesionales de mantenimiento y operación.
El tiempo de análisis es relativamente largo, especialmente para la separación de muestras complejas.
Combinando la capacidad de separación de la cromatografía líquida con la alta sensibilidad y selectividad de la espectrometría de masas para la identificación. La muestra se separa primero por cromatografía líquida y luego entra en el espectrómetro de masas. El espectrómetro de masas ioniza moléculas y mide la relación masa/carga (m/z) de iones para determinar la masa de la molécula, identificando así la luteolina. Mientras tanto, el análisis cuantitativo se puede realizar en función de la fuerza de los iones.
Pretratamiento de la muestra: Similar a HPLC, la muestra debe extraerse y purificarse para eliminar las sustancias que interfieren.
Configuración de los parámetros del instrumento: los ajustes de los parámetros para la sección de cromatografía líquida son básicamente los mismos que los de HPLC, pero la selección de la fase móvil debe considerar la compatibilidad con la espectrometría de masas. El espectrómetro de masas debe establecer parámetros como el modo de ionización (como la ionización por electropulverización ESI o la ionización química por presión atmosférica APCI), rango de escaneo, modo de detección (modo de iones positivos o iones negativos), etc. Para La luteolina, se pueden obtener buenos resultados de detección en el modo de iones negativos ESI.
Análisis e identificación: Inyectar la muestra en el instrumento, primero separarla por cromatografía líquida y luego obtener el espectro de masas en el espectrómetro de masas. Al comparar con bases de datos de espectrometría de masas conocidas de magnolol y combinar información como el tiempo de retención, se determina la presencia de magnolol y la cuantificación se realiza basándose en la intensidad de los picos de espectrometría de masas.
Tiene alta sensibilidad y selectividad, y puede identificar con precisión la estructura de la luteolina.
Las trazas de luteolina en muestras complejas también pueden ser eficacesY detectado.
Desventajas:
El instrumento tiene un alto costo y operación compleja, lo que requiere personal profesional para operar y analizar datos.
El análisis de los datos de espectrometría de masas requiere un cierto nivel de conocimiento y experiencia profesional.
El sistema conjugado en la estructura molecular de la luteolina puede absorber rangos de longitud de onda específicos de la luz visible ultravioleta. De acuerdo con la Ley de Lambert Beer (A = ε BC, donde A es la absorbancia, ε es la absortividad molar, B es la longitud de la trayectoria óptica y C es la concentración de la muestra), dentro de un cierto rango de concentración, la absorbancia es proporcional a la concentración de luteolina en la muestra. El CONTENIDO DE luteolina se puede determinar midiendo la absorbancia.
Dibujo de curva estándar: prepare una serie de soluciones estándar de diferentes concentraciones utilizando una concentración conocida de patrón de luteolina y mida la absorbancia en la longitud de onda de absorción máxima de luteolina (como 350nm) usando un espectrofotómetro UV visible. Dibuje una curva estándar con concentración como eje X y absorbancia como eje y.
Determinación de la muestra: Diluir el extracto de la muestra de prueba adecuadamente, Medir la absorbancia en la misma longitud de onda y calcular el contenido de luteolina en la muestra basándose en la curva estándar.
El instrumento es simple, fácil de operar y rentable.
Para muestras con alto contenido de luteolina, se puede realizar una detección rápida.
Desventajas:
Mala selectividad y susceptibilidad a la interferencia de otras sustancias con longitudes de onda de absorción similares en la muestra.
No se puede distinguir eficazmente entre luteolina y sus análogos estructurales.
Coloque la muestra en una placa de capa delgada recubierta con un adsorbente (como gel de sílice) y desarrollarlo en la placa utilizando un agente de desarrollo adecuado (como un disolvente mixto de tolueno acetato de etilo ácido fórmico). Los diferentes compuestos tienen diferentes capacidades de desorción de adsorción entre el adsorbente y el agente en desarrollo, moviendo así diferentes distancias en la placa de capa delgada para lograr la separación. El EXTRACTO DE Osmanthus se puede analizar cualitativamente comparando su valor de Rf con muestras estándar, o analizando semicuantitativamente por la intensidad de las manchas después de la reacción de color.
Preparación o compra del tablero de capa delgada: puede preparar su propio tablero de capa delgada de silicona o comprar tableros de capa delgada disponibles comercialmente.
Muestreo de la muestra: Disuelva la muestra en un disolvente apropiado y use una microjeringa o capilar para detectar la muestra en la línea de inicio de la placa de capa delgada.
Desplegado y desarrollo del color: coloque la placa de capa delgada en un cilindro en desarrollo que contenga un agente en desarrollo y desdoblarla. Después de que el borde frontal del agente en desarrollo se eleve a una cierta distancia, retire la placa de capa delgada y seque al aire. Luego, se utilizan reactivos de color apropiados (como el reactivo de tricloruro de aluminio) para el desarrollo del color, y la reacción entre la luteolina y el tricloruro de aluminio dará como resultado manchas fluorescentes bajo la luz UV. La posición del punto y la intensidad se observan bajo luz UV.
El equipo es simple, la operación es rápida y el costo es bajo.
Múltiples muestras se pueden seleccionar y separar preliminarmente simultáneamente.
Desventajas:
Cuantificación inexacta, utilizada principalmente para análisis cualitativo o semicuantitativo.
El efecto de separación es relativamente pobre y es posible que no sea posible separar completamente la luteolina y otros componentes de muestras complejas.
